ExactBlot™ Secondary Antibody for IP

没'轻' 没'重'，安然无忧
！

IP（免疫沉淀）实验是一种常用的生物化学实验技术，用于检测和分离特定的蛋白质。它基于抗体的高度特异性
，可以用来富集某个特定的蛋白质


，并去除其他非特异性的蛋白质。
免疫沉淀的简要步骤为：1）将抗体与固相支持物相互作用。2）抗体与待测样品中的目标蛋白质结合，形成抗原-抗体复合物
。3）通过洗涤步骤去除非特异性的蛋白质

。4）将特异性蛋白质从固相支持物上解离下来
，完成富集。5）通过多种方法对富集后的蛋白质进行分析。
免疫沉淀实验是研究蛋白质相互作用
、信号传导以及调控蛋白功能的重要工具之一，广泛应用于生物医学研究中
。

IP实验原理

IP中的轻重链干扰

当进行IP实验时
，IP抗体在洗脱后加入loading buffer的变性过程中被破坏了结构
，断裂为组成抗体的轻重链。此时若IP抗体种属与WB抗体种属来源相同
，变性后的抗体就会被常规Anti-IgG(H+L)二抗识别，显影时就出现了IP抗体变性后产生的轻重链
。其中轻链大小为25kDa左右，重链大小为55kDa左右，当目标蛋白分子大小在轻重链附近时，这类信号可能会影响713贵宾会检测线路对实验结果的判断。

避免轻重链杂信号的常见方法有：
1）捕获抗体、检测抗体采用不同来源物种


，使用针对检测抗体物种的特异性二抗；
2）捕获抗体采用没有恒定区的纳米抗体。
但是受限于实验经费和各种外部因素，这两种方法有时并不是这么容易实现。

713贵宾会检测线路ExactBlot™ IP专用二抗

为了帮助客户避免在免疫沉淀实验中出现的轻重链干扰问题
，713贵宾会检测线路生物开发了专用于IP实验的优化二抗，优化后的二抗具有空间特异性，能够识别空间构象表位，只与非变性的WB检测一抗相互结合，而不与变性后失去原本空间表位的捕获一抗结合
，因此既不识别抗体重链也不识别轻链
，轻松避免了实验干扰。

图左：使用常规Anti-IgG(H+L)
，检测时变性后的抗体轻重链均被识别

。

图右：使用713贵宾会检测线路- ExactBlot™ IP专用二抗

，有效避免轻重链干扰
，目的蛋白信号更加清晰。

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ExactBlot™ Anti-Rabbit IgG for IP (HRP)

Cat No. 550124

Application: WB,ELISA

Host: Mouse

Reactivity: Rabbit

ExactBlot™ Anti-Mouse lgG for IP(HRP)

Cat No. 550125

Application: WB,ELISA

Host: Rat

Reactivity: Mouse

713贵宾会检测线路的ExactBlot™IP专用二抗适用于各种IP实验，例如确定蛋白质复合物的组成成员

、研究蛋白质的亚细胞定位以及分析蛋白质的相互作用动力学等
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